免疫荧光技术是标记免疫技术中发展zui早的一种.它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。作为一名刚进实验室的小菜鸟,看了一下师姐的实验记录文档,那叫一个漂亮:
兴致勃勃的开始,一筹莫展的结局,我的是这样的
明明是按照同款操作步骤进行的,谁能给我一个解释,好在有位好心肠的师姐:
“你看下是不是细胞通透的时间不够,还是因为操作不熟悉zui后信号淬灭了,文档里的实验方法是好久之前的,一直没有更新。之前我们也都是摸索好几次,配的甘油进行封片的,但是效果时好时坏,好在后来直接用了现成的封片剂。。。。。”走过的弯路再走几次很可能还是弯的,但是师姐一句话就把它捋直了!
其实其他的倒没什么,不过“现成的”这三个字甚合我意!
现成的Fluoromount-G?封片剂,无需复杂有机溶剂溶解和孵育步骤,只需滴加一滴,就可以轻易解决从即时观察、短期观测到长期保存的所有问题,助你轻松get一张精美的免疫荧光图片。不仅可封片,还能防猝灭~
什么是荧光猝灭?
荧光素由内部因素和外部因素同时作用引起的不可逆破坏,导致荧光强度降低或丧失的现象。内部因素主要是分子从激发态回到基态以非辐射跃迁形式释放能量,外部因素主要因荧光分子在激发光照射下,历经多次激发/发射过程,导致分子内部结构发生不可逆变化,从而使其无法吸收更多光子,影响荧光的进一步发射,即分子的光漂白(Photobleaching)。另外,当激发光功率过高,荧光分子也可能被漂白,造成荧光淬灭现象。
什么是Fluoromount-G?封片剂?
Fluoromount-G是一种水溶性、非荧光性化合物,用来对zui后一步染色为水溶液体系的玻片样本进行封片,可以明显降低荧光显微镜下玻片样本分析中的荧光淬灭现象。而且,还可以提供含有细胞核探针DAPI形式的Fluoromount-G,可同时实现复染和封片,实用性更高。
Fluoromount-G?封片剂的特点是什么?
1.经典的水溶性抗荧光淬灭封片剂,数千篇应用文献,被外各大实验室认可;
2.与绝大多数荧光素兼容,包括FITC,PE,APC,Texas Red,罗丹明等,防止荧光淬灭;
3.操作其简单,只需滴加一滴即可实现封片;
4.光学透明,封片后光折射率佳;
5.封片后可实现样本低温长久保存;
6.稳定性高,室温运输和保存即可;
7.两种供货形式:不含细胞核探针(cat#0100-01);含细胞核探针DAPI(cat#0100-01);后者可同时实现复染和封片,实用性更高
※ 贴壁细胞样品
染色完毕后,吸尽液体。
滴一滴(~50μl)封片液于载玻片上,盖上贴有细胞的盖玻片,让细胞接触封片液,尽量避免气泡。
随后即可通过荧光显微镜观察样品。
※ 组织切片
染色完毕后,吸尽液体。
滴一滴(~50μl)封片液于组织切片上,盖上盖玻片,让切片接触封片液,尽量避免气泡。
随后即可通过荧光显微镜观察样品。
看到这,是不是觉得你离一张精美的免疫荧光图只差一滴Fluoromount-G?荧光封片液的距离!
Fluoromount-G®封片剂的特点是什么?看完后就懂了!
原文:https://www.cnblogs.com/abbkine/p/13959023.html